HPLC法测定消毒洗手液中邻苯基苯酚钠的含量

　　建立了一种高效液相色谱法(HPLC)测定消毒洗手液中邻苯基苯酚钠含量的检测方法。方法以体积比70∶30的甲醇-磷酸溶液(0.25mL磷酸加入到1000mL水中)为流动相，流速1.0mL/min，检测波长245nm，进样体积10µL。结果显示邻苯基苯酚钠的保留时间为7min左右，线性范围5~100µg/mL,方法的最低检出质量比为2.5mg/kg，最低定量质量比为8.5mg/kg，平均回收率为96.07%~107.06%，精密度(RSD)为0.24%~0.75%。该方法样品处理快速简便，分析方法准确可靠，适用于消毒洗手液中的邻苯基苯酚钠含量的测定。

　　关键词：高效液相色谱法消毒洗手液邻苯基苯酚钠

　　邻苯基苯酚钠与邻苯基苯酚均为高效低毒的广谱杀菌剂，具有杀菌、抑霉的作用，在消毒洗手液中作为杀菌的有效成分。含有邻苯基苯酚钠的消毒洗手液可有效杀灭大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌以及医院感染常见细菌及病毒[1-3]。但一些动物试验表明，邻苯基苯酚钠是一种潜在的致癌物质，对肾脏会产生毒副作用，亦可能会对视觉系统造成潜在的损害。2017年，邻苯基苯酚被世界卫生组织国际癌症研究机构列入3类致癌物清单中。2018年4月24日，欧盟发布通报，修订化妆品法规(EC1223/2009)，拟禁止使用邻苯基苯酚钠、邻苯基苯酚钾和邻苯基苯酚乙醇胺盐作为防腐剂用于化妆品中。我国《化妆品安全技术规范》(2015年版)中规定，邻苯基苯酚及盐类在化妆品中的使用限量为2mg/g[4]，但尚未有相关的国家标准及行业标准来监控消毒洗手液中邻苯基苯酚钠的使用。

　　因此，能够准确定量消毒洗手液中的邻苯基苯酚钠可为此类消毒产品的质量监控及研发提供有效依据，建立消毒洗手液中邻苯基苯酚钠的检测方法非常有必要。目前邻苯基苯酚的检测方法有很多，主要有紫外分光光度法[5]、液相色谱法[1,6]、气相色谱法[7]以及气相色谱质谱法[8]。邻苯基苯酚钠的检测方法主要有气相色谱法[3]，目前尚未查到液相色谱法。本文建立了高效液相色谱法检测消毒洗手液中邻苯基苯酚钠的方法，方法以甲醇-磷酸溶液为流动相，以245nm为检测波长。本方法的线性良好，具有较好的精密度和回收率，操作简便、分离效果好、准确，可用于定性及定量分析。

　　1试验部分

　　1.1仪器与试剂

　　仪器：高效液相色谱Waters2695、2487紫外检测器，美国Waters公司;XS205型电子天平，瑞士梅特勒-托利多公司;Cary100紫外分光光度计，Varian公司。试剂：邻苯基苯酚钠标准品，浓度83%，TCI;磷酸，色谱纯，国药集团化学试剂有限公司;甲醇，色谱纯，默克股份两合公司。流动相：甲醇-磷酸溶液(0.25mL磷酸加入到1000mL水中)，体积比70׃30。

　　1.2色谱条件

　　ZORBAXSB-C18柱(4.6mm×250mm×5μm);柱温30℃;流动相A为甲醇，流动相B为磷酸溶液(0.25mL磷酸加入到1000mL水中)，采用等度洗脱程序(A相与B相体积比为70∶30)，流动相使用前经0.45μm有机滤膜过滤;流速1.0mL/min;进样量10μL;检测波长245nm。

　　1.3标准溶液配制

　　准确称取0.1g(精确到0.001g)标准品，加入8mL左右的甲醇磷酸溶液，超声，待溶解完全后转移至100mL容量瓶中，用甲醇磷酸溶液定容，得质量浓度1000μg/mL的邻苯基苯酚钠标准储备溶液。再用移液管吸取1mL10000μg/mL标准储备液至10mL容量瓶中，用甲醇-磷酸溶液定容，得质量浓度100μg/mL的邻苯基苯酚钠标准储备溶液。使用前配成质量浓度分别为0、5、10、20、40、60、80和100μg/mL的标准系列溶液。

　　1.4试样处理

　　称取试样0.5g，精确至0.001g，置于25mL具塞比色管中，加入甲醇磷酸溶液20mL，涡旋60s，分散均匀，超声提取15min，冷却到室温后，用甲醇磷酸溶液定容，涡旋振荡摇匀，必要时离心分离。混液经0.45μm有机系滤膜过滤，滤液可根据需要用甲醇磷酸溶液进行稀释，保存于2mL进样瓶中作为待测样液，按照设定的色谱条件测定。

　　1.5结果计算

　　邻苯基苯酚钠的含量按式(1)计算。ω(邻苯基苯酚钠)=(ρ×V)×10-4/m(1)式中：ω—样品中邻苯基苯酚钠的质量分数(%)，ρ—进样分析样品溶液中邻苯基苯酚钠的质量浓度(μg/mL)，V—样品的定容体积(mL)，m—样品质量(g)。

　　2结果与讨论

　　2.1色谱条件的优化

　　利用紫外分光光度计，在200~800nm波长范围内全扫描。获得邻苯基苯酚钠的最大吸收波长为245nm，故选择245nm作为检测波长。根据一些文献报道，液相色谱检测邻苯基苯酚最为常用的流动相是甲醇-水、甲醇-乙腈-水，乙腈-磷酸盐缓冲液等。本文检测的邻苯基苯酚钠，相比较邻苯基苯酚,添加磷酸调节水相的pH,以体积比70∶30的甲醇-磷酸溶液(0.25mL磷酸加入到1000mL水中)作为流动相时，邻苯基苯酚钠的出峰时间在7min左右。

　　2.2样品定性分析

　　按照前述色谱条件，将不同剂型的消毒洗手液(表活型、皂基型)分别进样，每个样品进样3次，记录保留时间和峰面积。根据保留时间对样品峰定性，标准品与样品色谱图，在此色谱条件下，各样品峰峰形良好，没有杂质峰干扰。说明本方法色谱条件适用于消毒洗手液中邻苯基苯酚钠的测定。

　　2.3线性范围和检出限

　　准确配制0、5、10、20、40、60、80和100mg/L共6个浓度水平的邻苯基苯酚钠标准溶液，进样10µL，平行测定3次，以平均峰面积对样品质量浓度进行线性回归，结果见表1。由表1可知，邻苯基苯酚钠的质量浓度在5~100mg/L范围内，相关系数R2>0.999，标准曲线线性拟合良好。本方法以标准曲线最低点作为最低定量限，其三分之一作为检出限。当取样量为0.5g，定容体积为25mL时，方法检出限为0.0005μg，定量下限为0.0017μg。最低检出质量比为2.5mg/kg，最低定量质量比为8.5mg/kg。

　　2.4回收率与精密度

　　向空白表活型和皂基型消毒洗手液分别添加低、中、高3种浓度水平的标准样品，每个水平平行8份。加入邻苯基苯酚钠标准品后，按前述方法进行提取，测定邻苯基苯酚钠含量。结果显示，低、中、高三种浓度水平下在两种不同剂型洗手液中的回收率都很好，邻苯基苯酚钠在两种剂型洗手液中的加标回收率范围为96.07%~107.06%，方法的精密度(相对标准偏差，RSD)为0.30%~0.75%。结果表明，此方法具有很高的准确性。

　　2.5重复性试验

　　分别在表活型洗手液和皂基型洗手液空白基料中加入邻苯基苯酚钠标准品，各配制一份样品溶液，分别测得峰面积，然后根据回归曲线峰面积与质量浓度的关系式计算邻苯基苯酚钠的质量浓度，重复测定6次，考察该方法的重复性，重复性试验的RSD值分别为0.78%和0.49%，表明该法重现性良好。

　　3结论

　　本文建立了一种快速、准确的HPLC法测定消毒洗手液中邻苯基苯酚钠含量的方法。本方法回收率高，精确性强，检出限低，能非常有效地对消毒洗手液中的邻苯基苯酚钠含量进行监控。

　　参考文献

　　[1]赵敏,宁啸骏,周耀斌.高效液相色谱法测定化妆品中邻苯基苯酚的含量[J].香料香精化妆品,2010(6):25-27.

　　[2]郑晨,余雯静.邻苯基苯酚检测技术现状[J].中国科技博览,2010(26):32-32.

　　[3]罗嵩,张卓娜,朱英.气相色谱法测定消毒剂中对叔戊基苯酚钠、邻苯基苯酚钠、邻苄基对氯苯酚钠的含量[J].中国消毒学杂志,2016,33(6):517-520.

　　[4]张卓娜,林少彬,杨艳伟.高效液相色谱法同时测定化妆品中5种防腐剂[J].日用化学工业,2017,47(7):418-420.

　　[5]陈迪,刘楠囡,林雯,等.紫外分光光度计法测定茶叶中邻苯基苯酚的含量[J].福建茶叶,2017(12):5-6

　　医学护理论文投稿刊物：《中国消毒学杂志》注重科学性、实用性，旨在推广科研成果，交流工作经验，促进技术改革，发展消毒事业。以多种方式介绍国内外有关消毒与灭菌的科研成果、工作经验和理论知识。适合于广大卫生防疫人员和高、中级医护人员阅读，亦可作为从事科研、教学、食品、制药、兽医等工作人员的参考读物。

转载请注明来自发表学术论文网：http://www.fbxslw.com/yxlw/22394.html