红细胞叶酸的微生物检测法

　　摘要：叶酸是一种水溶性B族维生素，红细胞叶酸与红细胞更新过程有关，通常能准确反映一个人体内叶酸的长期营养变化，是作为评价人体营养状况的常用科学指标之一，用以帮助判断各种预防性营养干预。目前用于检测叶酸的检测方法很多，其中微生物法则就是用于检测体内叶酸的一种经典检测方法，灵敏度高。这种检测方法具有临床操作步骤简单、对临床仪器设备精度要求低、成本低等几大优点，适用于对临床结果分析报告，操作时间精度要求低的大中小规模临床研究和早期临床医学检测。

　　关键词:红细胞叶酸，微生物检测方法，原理，影响

　　引言：叶酸是一种人体日常必需的一种维生素。叶酸睡眠缺乏与各种神经疾病的早期发生频率有关。研究结果证实，妇女在初次怀孕前或者在怀孕早期，如果缺乏叶酸激素会直接导致整个胎儿脑部神经和血管发育缺陷。妇女在外围孕期适当补充叶酸激素可以有效预防孕期胎儿脑部神经和血管发育缺陷。孕期饮食补充叶酸也能帮助预防孩子出生缺陷，如先天性心脏病。此外，补充叶酸也可能有助于我们预防一些常见慢性病，如急型心血管疾病。

　　微生物论文投稿刊物：《卫生研究》是由卫生部主管，中国疾病预防控制中心主办，中国疾病预防控制中心营养与食品安全所承办，由深圳市疾病预防控制中心、深圳市慢性病防治中心、中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所和职业卫生与中毒控制所协办。

　　准确性地检测人体内叶酸营养水平指标是作为评价叶酸营养状况和效果判断各种预防性叶酸干预治疗效果的重要基础，具有重要现实意义。红细胞叶酸与人体红细胞长期代谢状态更新过程有关，反映了叶酸在人体内的长期不断变化代谢状态。近年来它被越来越多的人所使用。目前，检测叶酸的检测方法已经有很多，如放射微生物法、同位素放射免疫光谱分析法、气相色谱-离子质谱法、离子光谱捕获检测法和化学发光检测法。微生物分析法具有灵敏度高、准确度高、成本低等三大特点。它被接受并广泛使用，作为检测叶酸的一种标准检测方法。本文主要重点介绍微生物分析法用于红细胞叶酸检测的工作原理、意义、研究进展及影响因素。

　　1微生物方法检测叶酸的工作原理和检测意义分析

　　1.1微生物方法检测的工作原理

　　微生物法检查是用于体内叶酸检测的一种经典检测方法。这种培养方法的工作原理主要是通过利用叶酸元素作为培养微生物正常生长所需中必需的一种营养化学物质。在一定条件下，微生物生长的繁殖速度、与待测样品中的叶酸含量有关。通过测量微生物增殖后的浊度并通过标准曲线计算样品中叶酸的含量。微生物测定法对叶酸的检测灵敏度高。本方法具有操作步骤简单、对仪器设备要求低、成本低等优点。然而，也存在一些不足，例如时间，其易受外源叶酸和微生物污染的影响。因此，该方法适用于大规模流行病学研究和需要较少时间报告结果的临床试验。

　　1.2红细胞叶酸检测的意义

　　红细胞叶酸检测的主要意义在于当叶酸检测缺乏时，脱氧酶和胸苷酸、嘌呤酸等核苷酸结构形式和其他氨基酸的相互作用变化被直接阻断，细胞内磷酸酶的合成数量减少，细胞分裂和成熟过程受阻，并可能导致巨幼体红细胞继发性贫血。维生素a和叶酸激素缺乏的症状临床表现基本相似。两者均可直接导致巨幼体白细胞减少性贫血、白细胞数量减少症和急性血小板数量减少症，以及引起消化道其他症状，如厌食、腹胀、腹泻和舌炎，其中舌炎最为突出。舌红、舌头和肌肉萎缩、表面光滑，俗称"牛舌"疼痛。维生素a和叶酸缺乏症通常伴随其他神经系统症状，如乏力、手脚麻木、感觉功能障碍、运动障碍、外周炎性神经炎、亚急性或慢性的脑脊髓后细胞变性。后者主要是可见于恶性贫血。

　　儿童和老年人患者通常可能会长期出现一些精神紧张症状，如过度嗜睡或出现精神错乱。叶酸缺乏会直接引起人的情绪发生变化，补充叶酸情绪会很快消失。孕妇叶酸孕期缺乏，营养会大大增加一些前期疾病患者导致胎盘早剥的疾病发生率。患有巨幼儿白细胞缺陷性贫血的孕妇容易早期发生一些胎儿宫内细胞生长迟缓、早产和一些新生儿会在出生期间体重低。妊娠早期叶酸营养缺乏也容易直接导致早期胎儿脑部神经管发育畸形。叶酸长期缺乏会直接导致高度的同型半胱氨酸血症，从而可能增加多种心血管疾病的病发风险。叶酸缺乏会直接干扰人体食物中大量营养的消化吸收和通过肠肝循环的再循环代谢过程，因此叶酸缺乏是多种小肠系统疾病的常见临床并发症。

　　2.微生物法检测红细胞叶酸的进展

　　传统的检测方法是用静脉血样品制备溶解血液，红细胞叶酸浓度约为血清叶酸浓度的50倍，红细胞数量因人而异，因此需要同时检测血浆或血清叶酸和红细胞体积，然后用校正公式计算红细胞叶酸水平值，并且当血液样本的体积或稀释倍数未知时，或者当现场采集的血液值未知时，很难获得准确的红细胞叶酸结果。

　　由于纸血片标本中叶酸的制备工艺简单，稳定性好，该方法更适合大规模人群叶酸营养的流行病调查。因为溶解血液的制备需要一定的实验室条件，所以在现场流行病学研究中使用这种取样方法来评价红细胞的叶酸水平是不方便的。然而，在采血点制备和分离血细胞是可行的。研究表明，传统溶血液标本检测的红细胞叶酸水平与采用压缩红细胞之间存在显著相关性，但后者明显低于前者。可能的原因是当压缩红细胞标本用于检测红细胞叶酸时，需要添加外源性叶酸结合酶。

　　而微生物法检测红细胞叶酸要求设备操作比较简单，易于实现实验室系统的建立，灵敏度比较高，成本比较低，使用于大型发病人群的临床流行病学研究。

　　3微生物检测红细胞叶酸中产生的严重影响及注意事项

　　3.1、患者或其他受试者

　　长期服用抗生素或使用抗恶性肿瘤治疗药物的某些患者或其他受试者会严重影响服用叶酸含量检测后的结果。抗生素可以抑制体内微生物的正常生长，导致测定值低。抗生素对血清叶酸检测结果的干扰。在使用的时候要告诉患者在检查前不要使用抗生素等，以消除抗生素带来的的干扰。除了抗生素，一些抗肿瘤药物也抑制微生物的生长，导致测定值低。

　　3.2取样条件

　　抗凝剂通常用于血液采集，但是抗凝剂是否能抑制微生物的生长，结果是不同的。如有人认为抗凝剂能抑制微生物的生长，抗凝剂中的因素与微生物生长所必需的锰、镁和铁元素形成化合物，造成营养缺乏并影响微生物的生长。然而，一些人也认为微生物的生长不会因为使用的剂量小而被显著抑制。

　　3.3其他影响因素

　　皂素能促进血红蛋白中红细胞叶酸的解离，提高红细胞叶酸的检测值。但其效果与酸碱度有关，当溶解血液的酸碱度为弱酸时，加入皂素对检测结果没有影响。当溶解血液的酸碱度为6.0-7.4时，加入皂素可以显著提高叶酸的检测结果。当溶解血液的酸碱度高于5.5时，电子促进红细胞水解;当溶解血液的酸碱度低于5.时，电子反而会抑制红血球的水解。研究发现，当压缩红细胞在-70摄氏度储存1个月时，叶酸检测值不受影响。此外，在制备压缩红细胞时，白细胞层被保留，这稍微增加了测量结果，但是没有明显的差异。

　　4结束语

　　综上所述，虽然近年来出现了许多检测血液中叶酸的新方法，但微生物法仍是红细胞中叶酸的标准检测实验方法。该实验方法具有设备操作简单、易于实现实验室系统建立、灵敏度高、成本低等几大特点。更多的适合用于大规模发病人群的临床流行病的研究。

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　　个人简介：关丹丹

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